肉的宰后嫩化主要归因于肌原黏胶氯纶组成部分的破碎，肌原黏胶氯纶组成部分是由内源性球血清溶解反應酶挥发肌原黏胶氯纶和组织骨架球血清构成的。与几十块年来直到是青睐端点的钙球血清酶不同的，胱天球血清酶（caspases）近两天是感想法语录题。胱天球血清酶在组织凋亡的履行时间段起着至关首要的的功能，其中的caspase-3在人死了球血清溶解反應中的的功能是各上和较为复杂的，因而值得一看进三步设计。S-亚硝基化根据缓解钙产生、养分分解代谢、球血清质挥发和组织凋亡来缓解吃起来，其中包括嫩度和持水学习能力。一开始设计挖掘S-亚硝基化能够调低依赖于线粒体的caspase-3级联反應，这应该是胸肌组织凋亡和牛羊肉品质质量变迁的因为。caspase-3的设计关键是其与组织凋亡的相互关系，但是，很小有设计讨论S-亚硝基化缓解caspase-3的原则。

2024年9月由杭州畜牧业大学考研张万刚传授队伍在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱菌物为该研究提供了亚硝基化淡化组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

2英文微信标题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

杂志：Journal of Agricultural and Food Chemistry

202历经四年后果成分：5.7

展现时候：2024年9月

大家企业单位：南京农业大学

学习的材料：蛋白

拜谱出具技術：亚硝基化修饰组学

技巧交通路线：

一、科学研究后果

01.Caspase-3化学活化

近几年尚不模糊NO对caspase-3的仰制作方法用能不归因于NO介导的S-亚硝基化，不一氧化还原电位梯度方向的GSNO看做外源性NO产生，以促进caspase-3的身体之外S-亚硝基化。结果显示认为，与不存在GSNO的组相对于，100、200和400μM GSNO组的caspase-3生物酶类取得消减（图1），与仍然新闻稿一样的。GSNO进行处理消减caspase-3生物酶类的暗藏的原因仍有待于指出。

图1 不一质量浓度的GSNO加工对caspase-3催化活性的影响力

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化成度

科学探索Caspase-3的亚硝基化水平，以阐释GSNO对Caspase-3的影响性。经GSNO处里后，检则到caspase-3核蛋白S-亚硝基化抗弯强度提高（图2）。以上但是表示，外源性GSNO塑造培养可成功的诱惑caspase-3的休外S-亚硝基化。让人觉得大吃一惊的是，在如果没有GSNO现实存在的差表组中检则到一种忽闪的S-亚硝基化带，这表示caspase-3将会發生内源性的S-亚硝基化。不但，本科学探索中caspase-3的S-亚硝基化水平较高，而caspase-3的亲水性大大减少，这与以后的科学探索同一。其实，caspase-3的特女性朋友S-亚硝基化修饰语位点尚不了解，还所需进的一步的科学探索。

图2 GSNO治理 对caspase-3S-亚硝基化情况的作用

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化表达组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的队列。白色标签的队列表现S-亚硝基化肽，紫色标签的C表现S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱图

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3挥发结球蛋白

结球球蛋清最为那种关键的体组织骨架球球蛋清，在保护肌体组织形式的形式完善性和抽缩性的方面起着关键的作用，探析S-亚硝基化caspase-3对结球球蛋清溶解的敏感脆弱性极具关键有何意义。与Std（未用胱天球球蛋清酶-3和GSNO孵育的起始肌玻纤球球蛋清）组好于，0 μM GSNO组（肌原玻纤和caspase-3的孵育，无GSNO）的完善结球球蛋清成分取得大幅度降低，的提示caspase-3对结球球蛋清极具暗藏的球球蛋清油脂水解本事。在GSNO孵育后，完善结球球蛋清的成分强烈加入（P < 0.05）。还有就是，当GSNO浓硫酸浓度变高时，完善结球球蛋清的成分将持续上浮（P < 0.05）（图5）。这种看到证明，SNO表达的caspase-3以横向根据的方式英文调节结球球蛋清的溶解。

图5.S-亚硝基化caspase-3溶解结淀粉酶

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3挥发肌钙淀粉酶-T

肌钙蛋清-T (TnT)是原肌球蛋清设定承当肌群收缩毛孔的细细的的须要肌原弹性玻璃纤维棉蛋清。TnT的分解基本特征是查重到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化条件下，caspase-3对TnT的分解情况报告如下图6如图所示，与Std组（只含caspase-3和GSNO的肌原弹性玻璃纤维棉）相比之下，caspase-3组中30 kDa TnT场面描写取得扩大，取决于caspase-3参与的了TnT的分解，除此以外，caspase-3与GSNO的孵育造成的30 kDa TnT增涨。在100和200 μM GSNO组期间不查重到看不出的差距(P > 0.05)，而当GSNO的质量浓度达成400 μM 时，该场面描写取得限制(P < 0.05)。这一些发展取决于了SNO突显的caspase-3对TnT分解的促使做用。结蛋清和TnT是caspase-3的强烈底物，而GSNO外理减低caspase-3的化学活化可能性造成的肌原弹性玻璃纤维棉蛋清分解限度减低。总而言之经验，NO诱骗的S-亚硝基化都可以根据突显半胱氨酸残基来设定caspase-3的化学活化，接着进一部危害力其对结蛋清和TnT的蛋清蛋白质水解性能，可以危害力牛羊肉品性。

图6. S-亚硝基化caspase- 3溶解肌钙血清-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、工作小结

本分析有赖于讨论S-亚硝基化对caspase-3体现的印象简答陆陆续续对羊肉片肌原玻纤身体吸附的印象。淀粉酶S-亚硝基化可能体现caspase-3的半胱氨酸残基，为了引致caspase-3生物变低，进一歩促使了其对羊肉片肌原玻纤淀粉酶的淀粉酶电离专业能力。

三、拜谱工作小结

设计选择了酶活检查测量，亚硝基化突显组学分折，WB等检查测量手法，得知核蛋清酶S-亚硝基化可能突显caspase-3的半胱氨酸残基，这造成 了caspase-3活力的降底，并举两步控制了其对牛羊肉肌原合成纤维核蛋清酶的核蛋清酶电离特性。本设计为解读核蛋清酶质亚硝基化对肉嫩的调节管控体系具备一个多个新的第一人称视角。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的血清质组学、遮盖血清质组学、新陈代谢组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸类型成品，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺过酸、total氧化的呈现、分散巯基，欢迎大家咨询！

基准文献综述：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663